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牛血清作为细胞培养原料之一,确保它的无菌性、无支原体,同时还需要保证蛋白含量、渗透压符合要求。
牛血清中的大部分营养物质是蛋白、多肽等热敏感物质,只能通过过滤的方式来除菌和除支原体。
牛血清中很多成分,如白蛋白既是营养成分,又能维持血清渗透压;生长因子,含量微小,但其在细胞生产过程中起着非常重要的作用。因此在整个生产过程中需要尽量避免这些必须成分的损失。同时血清中还有不需要,甚至对细胞生长有害的成分,如纤维蛋白、抗体、脂蛋白等。
牛血清的来源包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清。不同来源的血清成分不同,如胎牛血清中无抗体存在,而小牛血清和成牛血清中抗体含量不同,过滤精制工艺稍有差别。
牛血清的制备工艺通常如下:
(1)粗制血清制备
适龄牛取血→离心→-20℃冷冻→化冻→纱布过滤除沉淀,收血清滤液
(2)血清精制除菌
路线1:0.2μm→0.2μm→0.2μm,多级滤芯压滤
路线2:1μm滤芯→0.65μm滤芯→0.22μm滤芯→0.1μm滤芯,多级压滤
路线3:0.45μm中空→0.22μm中空→0.1μm中空多级错流过滤
过滤工艺的选择,主要依据来源血清的差异、目标物质的保留和杂质的种类。
死端过滤具有设备占地面积小、滤芯更换方便,无浓液残留的优势,但死端过滤又具有易污堵,通量衰减快的缺点,适合比较干净的物料。
错流过滤具有膜面污堵轻,通量衰减慢的优势,同时又有浓液残留的问题,适合成分复杂的物料的过滤纯化。
优选PES中空纤维膜进行成分复杂的血清产品过滤,可实现菌体、支原体、大分子蛋白(纤维蛋白、脂蛋白、抗体蛋白)的截留去除。同时PES材质还具有低蛋白吸附,耐强碱清洗的特点,每批过滤后,进行膜清洗的同时进行菌体和内毒素杀灭、去除。
PES材质中空纤维膜具有不同精度,优选中空纤维膜精度,还可用于牛(或羊)血清抗体蛋白的截留、血清白蛋白透过,用于抗体蛋白柱层析洗脱液的富集浓缩,提高抗体浓度,减少冻干体积,降低能耗等。
博纳科技多年来致力于膜分离技术的应用工艺开发,将工艺、膜与设备相结合,积累了丰富的产品纯化经验和工程化放大经验,既解决工艺制造难题,又提高了产品质量,与客户共同提升行业技术水平。
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